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25.(11分)人体肝脏细胞中的乙醛脱氢酶2(A1,D2)是人体酒精代谢中的关键酶。研究人员利用定点诱变技术对AD川2基因进行改造后在大肠杆菌中表达，获得具有较好溶解性的乙醛脱氢酶2。所用质粒和操作过程如图。其中，Amp为氨苄青霉素抗性基因，Te为四环素抗性基因。质粒的外侧链为a链，内侧链为b链。基因Te转录的模板链属于b链的片段。改造后的ALDI2基因编码区首端到末端（其中一条链）的序列为5'ATCCATGCGCTC(中间核苷酸序列)CAGTGAGTAGCG-3'。四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。PstlADII2是因启动子Xhol动子终止子BamHI-复改造的ADH2基因粒④mp终止子质粒Xhol大肠杆菌含四环素的培养基限制酶BamH IPstIXho IXba I识别序列和切割位点(5'→3)G GATCCCITGCAGCI TCGAGTI CTAGA(1)通过定点诱变技术可制备自然界原本(选填“存在”或“不存在”)的蛋白质。(2)基因Amp转录的模板链属于链的片段，质粒复制的模板链是链。(3)过程②需要的限制酶是,选择依据是过程③常采用处理以提高操作效果。经过程④，在培养基上能形成菌落的大肠杆菌类型有(4)为扩增上图中改造的A,DH2基因，某同学设计了如下六种PCR引物，其中可选用（符合题意）的一对引物是(选填数字序号)。根据选定的引物，经过4次循环，最多可获得个符合要求的目的基因。D5'-TCTACACGCTACTCACTG-3 25'-TCTAGAATCCATGCGCTC-35'-CTGCAGATCCATCCGCTC-3'D5'-GGATCCCGCTACTCACTG-3'55-GCATCCATCCATGCCCTC-365-CTCGAGCGCTACTCACTG-3